植物叶绿体纯化试剂盒

植物叶绿体纯化试剂盒

Plant Chioroclast Purification Km

本产品仅可用于科研实验，严禁用于其他非科研用途

本产品是基于密度梯度满心的。专门用于从植物叶片中地化亮整叶绿体的试剂合

植物叶绿体纯化试剂盒        

背景资料:

叶绿体是重要的，负卖植物光合作用的细胞器，很多重要的特性(如雄性不育)也跟叶绿体相关。所以叶绿体是研究植物生理和母系遗传的重要材料。对植物叶绿体进行生化，违传和分子生物学研究都需要进行叶绿体纯化。

植物叶绿体纯化试剂盒  

 产品特点:

1.即用型试剂意。用户不需要单独配制各种溶液。

2.本产品足够15次提取，每次可处理50g叶片，的得到5mg左右叶绿体。

3.已经成功用于菠菜，大豆，莴笋，白菜，烟草和甜菜等植物，还可用于更多植物(可能需要优化条件)。

产品组成:

保存:RT，有效期1年。

植物叶绿体纯化试剂盒 使用方法:

注意:叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用器四和溶油均需要在4C预冷。离心时一定要在4.C进行，真心力以0而不显加的计算，如果需要研究叶程体的功的，提同过程还需要在昏暗的光将降件下进行。

1. 实验前1-2天霜植物放在暗室培养以减少叶健体中演盼粉粒的形成，否则真心时这些整较得容易快叶绿体被裂，叶片在实验首害先用白来水洗车，再用菜临水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采售后不能立即处理，则保存时齿要保持叶片漏润。即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。

2.新鲜(实验当天)制备油液A:寄自备的去离子水与海液A成分一按4:1的比例混合。然后在混合液中加入酒液A成分二干粉到终浓度0.7%(每100mL中加入0.1g干粉)，掘晃溶解后所得溶液即为溶液A，冰上预冷待用。一次实验(从30g叶片提取叶细体〕所需要的溶液A体职限材料不同而不同。落表A不的长期保存，需要现用现配。

3.新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3cm大小的碎片井漫泡在适量的预冷的溶液A中(每克叶片加4mL溶油 A，但对烟草和大豆，每克叶片需要加6mL溶液A)。

4.将漫泡了叶片的溶液A转移到Waring匀热机[即家用制备果汁的匀装机)中，低速匀装10吵。避免起淘沫，用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后，再低速勾杀10秒。注意:除Waring匀聚机外，还可以选择Dounce该璃匀泵器，Polytron勾装机和研磨(加玻璃珠)等裂解细的的方法，但这些方法的单次处理量都比较小。齿要将样品分成很多小份单独匀装，然后再汇集。

5.用带柄尼龙滤腆过滤匀聚液，可先将滤波收集到预冷的200mL量简中，再等分到4个预冷的50mL的塑料毒心管中(每个管中的泡液不要超过35mL)。带柄尼龙滤续后可反复使用。

6.在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对蔬菜，白菜和黄芦材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料)，白色沉淀为未破要的细胞或细胞核。

7.寄上清液(含叶绿体)转移到一个新的，预冷的50mmL塑料离心管中。

8.在水平转子离心机上4℃ 10000商心7分钟，小心卉上清，沉淀含叶绿体，呈浅绿色，

9，在沉淀中加入1.5mL预冷的溶液A，手弹商心管底部使叶拥体重悬。

注意:重易时最好避免滑液起湘，也不要用相头吹打，否则叶绿体容易破裂，规定下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时源党将白色定粉重悬。

将4管叶操体重悬液汇集(共约6mL)。此容液为叶绿体粗提产物，可直接用于后续的5D5-PAGE，Westem，ELSIA和蛋白组分析。如需用要以之为材料精提叶绿体，就需要将整型的叶媒体和亮整的叶绿体分开，根据植物的不同，可选用下述两种密度梯度离心法之一进行分商。

11.单浓度分离法(话适度白菜，菠菜和莴笋等材料）

a.在50TL塑料需心管中先加入GmL演液品成分一和4mL油液B，充分混合均匀。

b.在其波面上小心铺上第11步汇集得到的约ómL叶绿体重悬液。

c.在水平装子离心机上4℃ 1000c商心8分钟，最上屏的绿色带含破碎的叶绿体，线粒体和核椅体等，管底的绿色沉淀为完整的叶绿体。

d.小心爵上请倒出后，在叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶法A成分一，手指经弹管底使之置悬。

e.将叶操体重最浪转称到1.5mL再心管中并避光保存。可在相差学微接下检查叶候体车整性。叶绿体必酒尽快使用，否到求常容易失去活性。

12.双流恋分商法(适合烟草，甜菜和大豆等材料）

a.在14mmL塑料离心管中先加入0.5mL溶法A和2mL溶液B，充分混合均匀，得密度标度雪波

b.在另一试管中将3mL溶液A和2mL溶液B充分混合均匀，得密度梯度轻液。

c.将密座梯座轻液小心铺在密座梯度重液之上，然后将着10步汇集得到的叶操体重悬液中的4mLl还剩下2mL小心铺在密度那度轻液之上。

d.车水平转子离心机上4℃ 3200g需心15分钟，最上层绿色带含破碎的叶食体、域粒体和核峡体等。重液和轻液间的绿色带为完整叶操体。

e.用广口吸管小心将重液和轻液之间的绿色带(叶操体〕转移到新的商心管中，加入三倍体积的预冷的溶液A成分一。轻柔滑匀。

f.在水平装子离心机上4℃ 1700g离心1分钟，小心将上清倒出后，在绿色的叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一于指轻弹管底使之叶绿体重量。

g.将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存，也可在相差呈微镜下检查叶绿体光整性。叶绿体必须尽快使用，否则丰常容居失去活性。所得精提叶操体可用于后续的光合作用，电子链和磷酸化，跨胶转运，体外叶绿体蛋白合成，蛋白定位等研究，还可用于的叶细体膜，甚质，类喜体，叶绿体DNA和叶操体RNA纯化。

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