植物线粒体DNA提取试剂盒

植物线粒体DNA提取试剂盒

Plant mitochondrial DNA Extracticn K

产品货号:huayueyang447      产品规格：50|100T

本产品仅可用于科研实验，严禁用于其他非科研用途

植物线粒体DNA提取试剂盒用干丛植物叶片中分离出光整而纯化的域粒体、通合干田间采撞或者实验室信养的植物叶片中线校体DNA的提取制 ，报告基因检测 备，找检体DNA握取的关键是尽可能的去掉核DNA，本试剂盒利用差速离心得到比较纯净的线粒体，再利用DNA酶消化和裂解 新欧迁移EMSA缓冲系统等多步要去掉核DNA，最后得到纯净的线粒体DNA，可用于PCR等对纯度要求较真的实验。

产品特点:

1.每次可以处理10-20mL病波，得到2-5ug DNA  

2.纯度高，可直接用于后续得PCR检测。

3.一管式授作，减少污染，节约成本。

4.含疾液保存液[溶液A)，使于取样和运输。  

5.无毒环保，不需要使用苯酚和氯伤等有毒的有机溶液

植物线粒体DNA提取试剂盒

产品组成：

保存;2~8℃，有效期一年。其中RNase A及DNase I直于-20°C保存。线粒体裂解液使用前常器保存，如有沉定可37C水浴溶解，不影响使用。以端基乙醉置于常温，通风处保存。

植物线粒体DNA提取试剂盒

注意事项:

1. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

2. 进行Westerm Blot和2D-胶电泳，可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲波裂解线粒体。

3、6-疏基乙醉有毒，请注意酒风及贴护。

4. 一股来说，植物线粒体DNA含量很少，所得产物很难直接用电涂检测，如果要求测序或者其他实验，可合并多个样本或者 PCR后再进行。

准备工作:

1.使用前，在DNase |中加入600pL(50T)或者1100pL[100T)的DNA酶反应液，分装后-20℃保存三个月，如果超过三个月，活性可能会降低，请自行订购DNase l.

2.离心机票度下降到49C12~8C)，如无低温离心机，也可以常温离心，并将离心时间为10min的改为5min。但是后所得DNA品后及产量可能会有一定影响。

植物线粒体DNA提取试剂盒

操作步理:

1.样本采集前处理:无论田间自然生长还是实验案相织培养。采换前需速光生长24~48小时，以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量植物细胞裂解液，加入0.5%p-琼基乙种，10mL植物堆胞裂解液加入50uLB-验基乙种，混匀，形成植物地胞装解波B-陈基乙酸溶液，此座度可2-8℃保存一个月。

2.叶片用蒸临水清洗2-3次，滤纸吸干，有条件清用液氮研磨叶片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的叶片粉，加入

1.5mL预冷的植物细胞型解液/3-边基乙醇溶液，溻匀，如果无条件(无液氮)，请预冷研体，取洗过的叶片1000mg，用剪刀剪为碎决故入玻璃匀泵器或者研体中，加入1.5mL预冷的植物细胞裂解液(3-琼基乙种溶液。冰上研磨至看不见明星组织块

3.将研磨物放置合适的商心管，4℃，1000xg离心5min:

4.将上清转移到一新的离心管中，在沉定中加入0.5mL植物细的裂解液3-流基乙醉溶液。温匀，再次4°℃，1000xG商心5min，取上清;合并两次上清，将上清4℃ 1000xg再次离心5min。

5.取上清，加入一新的离心管中，4c，16000xp需心10min。再心后的上清合的第成分，可以中提取的需蛋白。将上清转称到新商心管，线检体沉淀在管底。

6.在线粒体沉淀中加入0.5mL线粒体清洗液重悬线粒体况定，4℃，1000xg高心5min

7.取上清，加入一新的离心管中，4℃，16000xg需心10min。弃上清，高纯度的域粒体沉淀在营底

8.加入100μL DNA酷反应浓重悬域粒体，吹打均匀后，再加入10uLDNase|溶液|见准备工作)，混匀，37℃水滃10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃，12000xg离心5min。尽可能的弃上清，再加入20OULTE生景线粒体沉定，4C，12000xg离5min，洗去致留的DNA酷。

9.得到的沉淀，用200pL TE缓冲液重悬线粒体沉淀，加入10pLRNase A。加入200μL线粒体裂解液，轻轻调匀(不可吹打)，故置1~2min，再加入150儿蛋白沉淀液，迅速温匀。4℃，12000xg商心5min。此步疆可进一步去除核DNA.

10,可上清，加入一新的商心管中[如用于降切分析，可加入此步;选用等体积的酚氰仿异戊醉25:24:1抽提一次，再用氨仿抽规

一次，或者真接用氙仿抽提两次，一般来说，此步可去掉一些微量蛋白及推类，但会进成线粒体DNA的损失，因而用干PCF时可省，并不影响后续实验)，加入0.6倍体积的异丙)例(如无异丙醇，可加入2.5倍体积的乙醉沉淀DNA，如离心管太满可分两管)及5-10uL柏酸柏酸助沉剂，混匀，-20℃沉淀半小时左右(此步可省)，4*℃，12000xg高心10min11.弃上清，再加入imL70%乙降清选，4°℃，12000xg商心5min。重复用70%乙降造一次。12.弃上清，再次高心imin雨弃上清。不要得到管度，开美流干的5-15min13.加入20-30ULTE缓冲凌，轻弹管底，37C水浴5分钟，线粒体DNA容解14.进行DNA电泳检测及-20℃保存，进行下步的实验。

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