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植物线粒体DNA提取试剂盒

植物线粒体DNA提取试剂盒

植物线粒体DNA提取试剂盒

Plant mitochondrial DNA Extracticn K

 

产品货号:huayueyang447      产品规格:50|100T

本产品仅可用于科研实验,严禁用于其他非科研用途

植物线粒体DNA提取试剂盒用干丛植物叶片中分离出光整而纯化的域粒体、通合干田间采撞或者实验室信养的植物叶片中线校体DNA的提取制 ,报告基因检测 备,找检体DNA握取的关键是尽可能的去掉核DNA,本试剂盒利用差速离心得到比较纯净的线粒体,再利用DNA酶消化和裂解 新欧迁移EMSA缓冲系统等多步要去掉核DNA,最后得到纯净的线粒体DNA,可用于PCR等对纯度要求较真的实验。

产品特点:

1.每次可以处理10-20mL病波,得到2-5ug DNA  

2.纯度高,可直接用于后续得PCR检测。

3.一管式授作,减少污染,节约成本。

4.含疾液保存液[溶液A),使于取样和运输。  

5.无毒环保,不需要使用苯酚和氯伤等有毒的有机溶液

植物线粒体DNA提取试剂盒

产品组成:

组成

50T

100T

DNasel  

12mg

2x12mg

 RNase A

 0.5mL

 2x0.5ml

 -瑰基乙醇

 1mL

2x1mL

植物细胞裂解淡

 25mL

 50mL

线轻体清洗液

100mL

2x100ml

DINA酶反应液

 6mL 12mL

 6mL 12mL

找粒体制称液

10mL

 20mL

蛋白沉淀液

7.5mL

 15mL

核酸動沉剂

0.5mL

1mL

TE缓冲液

25mL

50mL

保存;2~8℃,有效期一年。其中RNase ADNase I直于-20°C保存。线粒体裂解液使用前常器保存,如有沉定可37C水浴溶解,不影响使用。以端基乙醉置于常温,通风处保存。

植物线粒体DNA提取试剂盒

注意事项:

1. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。

2. 进行Westerm Blot2D-胶电泳,可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲波裂解线粒体。

36-疏基乙醉有毒,请注意酒风及贴护。

  1. 一股来说,植物线粒体DNA含量很少,所得产物很难直接用电涂检测,如果要求测序或者其他实验,可合并多个样本或者 PCR后再进行。

 

准备工作:

1.使用前,在DNase |中加入600pL(50T)或者1100pL[100T)DNA酶反应液,分装后-20℃保存三个月,如果超过三个月,活性可能会降低,请自行订购DNase l.

2.离心机票度下降到49C12~8C),如无低温离心机,也可以常温离心,并将离心时间为10min的改为5min。但是后所得DNA品后及产量可能会有一定影响。

植物线粒体DNA提取试剂盒

操作步理:

1.样本采集前处理:无论田间自然生长还是实验案相织培养。采换前需速光生长24~48小时,以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量植物细胞裂解液,加入0.5%p-琼基乙种,10mL植物堆胞裂解液加入50uLB-验基乙种,混匀,形成植物地胞装解波B-陈基乙酸溶液,此座度可2-8℃保存一个月。

2.叶片用蒸临水清洗2-3次,滤纸吸干,有条件清用液氮研磨叶片1-2克,研磨完后,取800mg左右研磨的叶片粉,加入

1.5mL预冷的植物细胞型解液/3-边基乙醇溶液,溻匀,如果无条件(无液氮),请预冷研体,取洗过的叶片1000mg,用剪刀剪为碎决故入玻璃匀泵器或者研体中,加入1.5mL预冷的植物细胞裂解液(3-琼基乙种溶液。冰上研磨至看不见明星组织块

3.将研磨物放置合适的商心管,4℃,1000xg离心5min:

4.将上清转移到一新的离心管中,在沉定中加入0.5mL植物细的裂解液3-流基乙醉溶液。温匀,再次4°℃,1000xG商心5min,取上清;合并两次上清,将上清41000xg再次离心5min

5.取上清,加入一新的离心管中,4c16000xp需心10min。再心后的上清合的第成分,可以中提取的需蛋白。将上清转称到新商心管,线检体沉淀在管底。

6.在线粒体沉淀中加入0.5mL线粒体清洗液重悬线粒体况定,4℃,1000xg高心5min

7.取上清,加入一新的离心管中,4℃,16000xg需心10min。弃上清,高纯度的域粒体沉淀在营底

8.加入100μL DNA酷反应浓重悬域粒体,吹打均匀后,再加入10uLDNase|溶液|见准备工作),混匀,37℃水滃10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA4℃,12000xg离心5min。尽可能的弃上清,再加入20OULTE生景线粒体沉定,4C12000xg5min,洗去致留的DNA酷。

9.得到的沉淀,用200pL TE缓冲液重悬线粒体沉淀,加入10pLRNase A。加入200μL线粒体裂解液,轻轻调匀(不可吹打),故置1~2min,再加入150儿蛋白沉淀液,迅速温匀。4℃,12000xg商心5min。此步疆可进一步去除核DNA.

10,可上清,加入一新的商心管中[如用于降切分析,可加入此步;选用等体积的酚氰仿异戊醉25:24:1抽提一次,再用氨仿抽规

一次,或者真接用氙仿抽提两次,一般来说,此步可去掉一些微量蛋白及推类,但会进成线粒体DNA的损失,因而用干PCF时可省,并不影响后续实验),加入0.6倍体积的异丙)(如无异丙醇,可加入2.5倍体积的乙醉沉淀DNA,如离心管太满可分两管)5-10uL柏酸柏酸助沉剂,混匀,-20℃沉淀半小时左右(此步可省)4*℃,12000xg高心10min11.弃上清,再加入imL70%乙降清选,4°℃,12000xg商心5min。重复用70%乙降造一次。12.弃上清,再次高心imin雨弃上清。不要得到管度,开美流干的5-15min13.加入20-30ULTE缓冲凌,轻弹管底,37C水浴5分钟,线粒体DNA容解14.进行DNA电泳检测及-20℃保存,进行下步的实验。

 

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