细菌膜蛋白提取试剂盒
细菌膜蛋白提取试剂盒
Bacterial membrane protein extraction kit
产品货号:huayueyang448 产品规格：50|100T
本产品仅可用于科研实验，严禁用于其他非科研用途
细菌膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产膜蛋白提取试剂高，可以从备种菌体中提取膜蛋白，可用于绣化蛋白的粗品制备及展蛋白制备。
，凝胶迁哆EMSA 提取过理简单方便。本试剂童含有的独特配方能够有效溶解细的膜组册。试利食含有蛋白阵抑制利混合物，但止了蛋白酶对至
，亚细胞结构研究 白的降解。为提取高历晕的看白提供了候证
，菌株菌种
，抑制剂激活剂 本提取的蛋白可用于Westem Bltting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELI5A、转录活性分析、Gelshifte胶阻井实验、酶活性
，其他相的生物学试剂 测定等下游蛋白研究
·生化试剂
，抗体挑原 本试剂合提取的蛋白为具有天优蛋白构象的活性蛋白。本试剂意中不含有EDTA，与金属整和层析等下游应用兼容。本试剂
，血液制品 高搜取的蛋白样本含有高浓度的造成分，不可直接用干2D电话，如下游实验需要直楼用干等电餐售，双向电泳。请使用我公司
·培养基 其他期号的试利意，也可以将很后样品除起后再用于2D电话，用吃盐性脱盐处理，
细菌膜蛋白提取试剂盒
产品特点:
1.使用方便，从细菌中提取蛋白不用经过越声破碎等前处理。
2.含蛋白稳定剂。提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂源合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。油混合物优化的相成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶，半酰氢陵陵蛋白酶、天冬氢酸蛋白酶、丙氨融-氢基肽酶等5,本品可用于革兰氐阳性苗和革兰氏腾性菌6.本品不含EDTA，可以用于金属整合层析等下游应用。
细菌膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
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组成 |
50T |
100T |
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:烟苗慢蛋白抽提液A |
25mL |
50mL |
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拍苗隆蛋白挂提液日 |
250UL |
500uL |
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腆蛋白溶解波C |
10mL |
20mL |
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蛋白酶抑制剂温合物 |
100mL |
2x100ml |
保存:蛋白酶抑制剂-20*C保存;蛋白提取液，演解液2-8C保存，有效期1年。
保存事项:
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃保存，开盖使用后-20“C保存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是图体状态。从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变或技体状态后离心至管底部再开盖.
日备同材:
移液器、离心机、振游器、涡旋混匀器、PBS、蛋白定量试剂合
注意事项:
1.旋帽离心营装的试剂在开盖前请短暂离心，将着内壁上的油体甩至管底，继免开盖时波体洒落，
2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温
3、蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉定，不影响使用，溶解后正常使用。
4.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是图体状态。从冰箱取出后恢复至室温或57℃短时间水浴，变或技体状态后离心至管底都再开盖
5..提取液A用苗需一直置于2~8C，否则下游续蛋白提取时会导致不容易分层。
6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法:
1.提取波制备:
每500pL净的提取法A中加入5pL提取法B和2pL蛋白酶抑制剂混合物。充分混匀后置冰上备用，
。相据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。。加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制制。
。蛋白样品用干创定某些蛋白酶活性等下游实验时，注意相据实际情况调救抑制剂混合物是否加入。。提取液A在使用前第一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。。以下步暖中使用的蛋白握取液为此步配制好的含蛋白阵抑制剂的提取感。
2.离心收售首体，用PBS选菌体2款。
。加入PB5重量混匀，5000xg商心10分钟。
。不同菌种需要的离心力有差异，可以根据实际情况调整离心力，采用平时收集菌体的转速即可。
3.按每100-150mg湿重菌体排本加入500uL冷的提取液A(大的菌体和提取液体积比13-15，完全港没菌体即可)，吹打程匀，在2~8°C振菌1~2小时，至菌体裂解完全，该体进清，菌体沉定减少。注:
。必须在2~8C条件下摄落，不可以幸温据落。
。使用操荡圆或摇床的较低转速，保持液体稍物失动即可。可以善紧商心管。将离心管倾料改置或者核盖，以利于依体报
。如果没有2~8C持续据落条件，也可直接置2~8C冰箱静量1~2小时。中间每隔10分钟涡旋振落温匀即可。
。如果有超声条件，可以在40-300W，超声5a/间隔5c条件下起声几分钟。至港请。超声有利于提高膜蛋白回收率。
4.寄菌液在2-8"C低温下12000xg离心5分钟，取上清。
5.在37*C水浴10分钟。
6.在37%℃，1000xg有心3分钟。
。此步因必须37℃条件下离心。
。如果离心机不可控温，可以不离心，征长上一步要水浴时间，至溶液分展清晰即可。或者在幸温条件下离心，披短商心时同至1分钟。
7.此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大的50uL液体
注:
。 下层为粘胸液体。
。未来全分好层时看上去可能像3层，保留中间的界面层即可。
- 用50-200pL的模蛋白溶解油油解该溶液。即得细菌薄蛋白样品。
注
。膜蛋白比较难溶解，不能很快溶解调句，可以再加入溶解液后稍微收打滑匀，然后置于4“C冰箱静置至溶解。中途用移浓器轻轻吹打混匀一次。静置后取出再次用移液面稍微吹打遇匀即可。。转置直至管底透明较状物完全溶解。
9.寄上述蛋白提取物定量后分装于-80”亡冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注:
。 建议用BCA法进行蛋白定量。
。蛋白样品-80*C存放一年设问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污的。
细菌膜蛋白提取试剂盒
常莞问题:
1.蛋白浓度低?
膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细的上样量。处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低，只要透当延长试剂A的处理时间即可，最好在持续振荡的条件下处理，没有振饰器也可问隔几分钟用没头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法，不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干线Bradford法的组份，导致电量不准。如果已经进行过遇析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量，
3.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂童不含有离子型去垢剂担份。不破坏蛋白的结构。没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和话性，
4.膜蛋白电冰没有条带?
膜蛋白样品通常滚度较低，电冰前一定要进行蛋白定量，以保证电冰是蛋白上样量足等。蛋白样品中含有去后剂，注意蛋白定量方法的选择，防止不合通的方法导致的蛋白浓度数据异常偏高，从而导致依据错误的蛋白浓度数据上样导致上样量不
腰蛋白提取好后，用洁解液充分溶解后，可以起声处理一下，再进行蛋白定量，蛋白加Loading Buffer后可以不用煮满，采用50℃悦酒30分钟。蛋白Lcading Buffer中SDS终装度含量可以缓高至3%-10%。
有些样品的横蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀酸蛋白，再使弹蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清断的蛋白条带。电泳时最好采用低电压低电流电泳。
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