毕赤酵母感受态制备及转化试剂盒

        毕赤酵母感受态制备及转化试剂盒

 

毕赤酵母感受态制备及转化试剂盒 200次 CAT:huayueyang0673   850

组成及储存条件：

 

毕赤酵母感受态制备液   30ml   RT

毕赤酵母转化液         100ML  RT

酵母促转化剂            1ML  -20℃

YPG Plus（送）          50ml   4℃

 

毕赤酵母感受态细胞的制备 ：

1. 活化菌种。-80°C保存的菌种在 YPD 固体培养基上划线，30°C培养 2-4d。

2. 挑取酵母单菌落接种到 3ml YPD 液体培养基中，30°C过夜培养。

3. 第二天转接到含有 30ml YPD 液体培养基的三角瓶中继续培养，等到

OD600 到 0.5-0.6 范围内。收集细胞，4000rpm，离心 5min， 去上清。

4. 沉淀用 30-50ml 的无菌的去离子水悬浮。4000rpm，离心 5min，去上清。

5. 沉淀用 300μl 的毕赤酵母感受态制备液悬浮。

（每 30ml 的酵母菌对应 300μl 毕赤酵母感受态制备液，最多不超过 1ml）。

6. 把酵母细胞悬浮液分装到 1.5ml 离心管中，每管分装 100μl，用于转化一

个质粒即一个反应。感受态细胞应现做现用或于 4°C放置不超过 12h。

 

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毕赤酵母转化 ：

1. 取一支无菌的 1.5ml EP 管，依次加入预冷的目的质粒 1-3μg，酵母促转化

剂 5μl，100μl 冰上融化的感受态细胞，毕赤酵母转化液 500μl，轻轻翻转

混匀 6-8 次；

2. 30°C水浴 30min，每 15min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

3. 每支加入 20μl 的二甲基亚砜；

4. 42°C水浴 15min，每 7.5min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

5. 12000rpm 瞬时离心弃上清，每支加入 1ml 的 YPG Plus 于 30°C，200rpm

复苏 1h；

6. 12000rpm 瞬时离心弃上清，用 100μl 0.9% NaCl 重悬，涂板，30°C培养

48-96h。

 

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注意事项：

1. YPD 固体培养基配制时加入 2%的 Agar。

2. 使用酵母促转化剂前，请把装有酵母促转化剂的管子在沸水中煮沸 5min，

然后立即放在冰上，用后放在-20°C储存备用。

3. 全程均要无菌操作

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毕赤酵母转化 ：

1. 取一支无菌的 1.5ml EP 管，依次加入预冷的目的质粒 1-3μg，酵母促转化

剂 5μl，100μl 冰上融化的感受态细胞，毕赤酵母转化液 500μl，轻轻翻转

混匀 6-8 次；

2. 30°C水浴 30min，每 15min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

3. 每支加入 20μl 的二甲基亚砜；

4. 42°C水浴 15min，每 7.5min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

5. 12000rpm 瞬时离心弃上清，每支加入 1ml 的 YPG Plus 于 30°C，200rpm

复苏 1h；

6. 12000rpm 瞬时离心弃上清，用 100μl 0.9% NaCl 重悬，涂板，30°C培养

48-96h。

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