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A4电转,电击农杆菌感受态细胞

A4电转,电击农杆菌感受态细胞

 A4电转,电击农杆菌感受态细胞

 

CAT:huayueyang0922  10*50ul

Ar.A4 Electro:               50μl/支

保存条件(保质期):            -80℃(12个月)

 A4电转,电击农杆菌感受态细胞

基因型:

Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)

A4电转,电击农杆菌感受态细胞

产品说明:

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。唯地生物开发的Ar.A4发根农杆菌电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pK7WGF2质粒 (size:11876 bp)检测转化效率>10cfu/μg DNA;经pK7WGF2-ZH质粒(size:40 kb)检测转化效率可达5×10cfu/μg DNA。

A4电转,电击农杆菌感受态细胞

操作方法:

1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入0.01-1 μg质粒DNA(体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解;转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。

 

3. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯从冰中拿出,吸水纸吸干外表面水份,快速放入电转槽中,启动电击,电击完成快速插入冰中,加入1 ml无抗生素的TY,并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上,倒置放28℃培养箱培养2-3天

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发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。唯地生物开发的Ar.A4发根农杆菌电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pK7WGF2质粒 (size:11876 bp)检测转化效率>10cfu/μg DNA;经pK7WGF2-ZH质粒(size:40 kb)检测转化效率可达5×10cfu/μg DNA。

 

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保存条件(保质期):            -80℃(12个月)

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基因型:

Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)

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产品说明:

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。唯地生物开发的Ar.A4发根农杆菌电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pK7WGF2质粒 (size:11876 bp)检测转化效率>10cfu/μg DNA;经pK7WGF2-ZH质粒(size:40 kb)检测转化效率可达5×10cfu/μg DNA。

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操作方法:

1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入0.01-1 μg质粒DNA(体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解;转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。

 

3. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯从冰中拿出,吸水纸吸干外表面水份,快速放入电转槽中,启动电击,电击完成快速插入冰中,加入1 ml无抗生素的TY,并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上,倒置放28℃培养箱培养2-3天