BY4742感受态细胞

BY4742感受态细胞 感受态细胞

酵母BY4742感受态细胞 Competent cell

产品储存：-80 ℃保存，6个月有效。

产品组成：       CAT;YES00041s

BY4742感受态         10*100ul       -80℃

Carrier DNA 10ug/ul     100ul        -20℃

PEG/LIAC                  5ml          4℃

BY4742感受态细胞产品组成：

基因型：

 MAT alpha, his3Δ1, leu2Δ0, lys2Δ0, ura3Δ0

BY4742感受态细胞使用方法：

1.取100 µL冰上融化的感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA(95-100 ℃，5min，快速冰浴，重复一次)10 µL，PEG/LiAc 500 µL并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2.将离心管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3.5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400 µL重悬，离心30 s弃上清。

4.ddH2O 50-100 µL重悬，涂板，29℃培养48-96 h。

5.筛选培养基可选本公司SD系列产品

BY4742感受态细胞注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. 酿酒酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30 ℃；高于31 ℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29 ℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29 ℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。

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