W303a(W303-1A) 感受态细胞

W303a(W303-1A) 感受态细胞

酵母W303a(W303-1A) Competent cell

产品储存：-80 ℃保存，6个月有效。

产品组成：       CAT;YES0031S

W303-1A感受态         10*100ul       -80℃

Carrier DNA 10ug/ul     100ul        -20℃

PEG/LIAC                  5ml          4℃

W303a(W303-1A)产品组成：

基因型：

  MATa ade 2-1 can1-100 his3-11 leu2-3 leu2-112 trp1-1 ura3-1

W303a(W303-1A)使用方法：

1. 取感受态细胞100 µL于冰上融化的，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100 ℃，5 min，快速冰浴，重复一次) 10 µL，PEG/LiAc 0.5mL并吸打几次混匀，30 ℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2. 将管放42 ℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400 µL重悬，离心30s弃上清。

4. ddH2O 50 µL重悬，涂板，29℃培养48-96 h。

W303a(W303-1A)注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. 酿酒酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30 ℃；高于31 ℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29 ℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29 ℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。

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