酵母蛋白提取试剂盒

 

产品及特点:

本产品专门用于快速提取微量酵母蛋白用于 SDS-PAGE 凝胶电泳和

Western 印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法,适合于

各种形态的各种酵母材料。本产品的其主要特点是:

1. 破壁效率高,能达到 80-90%

2. 可以处理各种酵母样品。

3. 操作简单,得到的裂解液可以直接用于 SDS-PAGE Western 印迹分析。

 

产品组成:

成 份

编 号

50 次包装

溶液 A

HYY23964

100 mL




溶液 B 成分一


50 mL




溶液 B 成分二


1.5 g




玻璃珠,400μm


5 g




使用手册


1 份

 

运输及保存:常温运输、4℃保存(溶液 B 成分二需-20℃保存),有效期一年。

 

自备试剂:酵母培养基

 

使用方法准备工作:将溶液 B 成分二(干粉)全部加到 50mL 溶液 B 成分一中,充分摇晃使之全部溶解,成为溶液 B,然后分装成小分(体积根据每次实验的样品数决定)并放-20℃长期保存。  

1、 将酵母细胞接种到 5mL YPD 培养基中,30℃摇晃(250rpm/分钟)过夜培养使其 OD600 达到 0.52.0  

2、 把酵母细胞培养物转到装有 2mL 预冷溶液 A 10-15 mL 离心管中,混匀。  

345000g 离心 5 分钟沉淀酵母细胞,吸出上清液。

4、 用 30μL 溶液 B 悬浮酵母细胞,并快速转移到 1.5mL 塑料离心管中。

5100℃下保温 3 分钟,使蛋白酶失活,样品存放于-20℃。

6、 加入 0.1g 的玻璃珠。  

7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合 2-10 分钟。  

8、 加入 70 μl 溶液 B,稍加振荡,置 100℃保温 1 分钟。

9、 取 5-20μl 抽提液上样直接进行 SDS-PAGE 凝胶电泳。

    注:若蛋白浓度较高,细胞破裂后可用多余溶液B适当稀释后再电泳。



 

 

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