C43(DE3)pLysS化学感受态细胞

C43(DE3)pLysS化学感受态细胞

C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

C43(DE3)pLysS化学感受态细胞基本信息：

C43(DE3)pLysS基因型:

F– ompT gal dcm hsdSB(rB- mB-)(DE3)pLysS

C43(DE3)pLysS菌株介绍：

C43(DE3) pLysS菌株起源于BL21(DE3)，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。C41(DE3)pLysS 跟BL21(DE3) 的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白（1-5）的能力，此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；C43(DE3)来源于C41(DE3)，是通过筛选C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。C43(DE3) 菌株具有比C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以说C43(DE3)菌株与BL21(DE3)相比拥有至少两个未知突变，正是这两个未知突变使其获得了更广泛的表达毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。此菌株含有DE3区，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。C43(DE3) pLysS 比C43(DE3)多一个pLysS质粒，能更有效地表达有毒蛋白。

C43(DE3)pLysS使用说明

1.         本产品采用干冰运输，收到后请直接冻存于-80℃冰箱。

2.         取冻存于-80℃的100μl感受态细胞于冰上融化；

3.         加入1μl纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30min；

4.         将菌液放入42℃水浴中热激45sec，立即放入冰浴中2min；

5.         加入900μl SOC/LB培养基，于37℃恒温摇床上150rpm×45min温育；

6.         将菌液5000rpm×5min离心，弃尽上清；

7.         取100μl新鲜LB培养基将菌体打散，均匀涂布于对应抗性平板表面；

8.         平板可先正向37℃放置1h,待液体吸收完毕，再倒置37℃培养过夜。

C43(DE3)pLysS注意事项

1.         为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.         本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。

3.         混入质粒或连接产物时应轻柔操作，感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

4.         涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

5.         新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

6.         涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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